A revista Science Translational Medicine publicou um artigo questionando os resultados de mais de 1.000 estudos científicos de tumores cerebrais. Estamos falando de experimentos realizados com células isoladas de glioma há 50 anos. Descobriu-se que essas células vêm de uma fonte completamente diferente.
Muitas pesquisas médicas e biotecnológicas são realizadas em culturas de células. Eles são obtidos inicialmente de células isoladas de tecidos humanos, animais e vegetais. Por exemplo, HeLa é uma linhagem de células de câncer cervical de uma mulher chamada Henrietta Lacks, que morreu em 1951. Ainda é usado em farmacologia para testar novos tipos de medicamentos. Graças a enzimas especiais, HeLa são virtualmente imortais e podem se dividir quantas vezes quiserem, o que lembra muito os organismos dos filmes de ficção científica. Ao longo dos anos, as células cancerosas evoluíram e alguns cientistas até as referem a uma nova espécie.
Os pesquisadores costumam usar as linhas fornecidas pelo repositório ATCC (American Type Culture Collection) e outros bancos de cultura de células. Além disso, várias cepas de microrganismos e produtos biológicos são armazenadas nas geladeiras dessas organizações. A coleção ATCC inclui mais de 3.000 linhas de células humanas e animais, 1.200 híbridos (híbridos de células imunológicas e cancerígenas), 4.000 vírus vegetais e animais, bem como protozoários, leveduras e fungos.
A linha U87MG, talvez uma das culturas de células mais comumente usadas em trabalhos científicos, são células isoladas de glioma humano. É o tumor cerebral mais comum. Cientistas apreenderam o U87MG de um paciente de 44 anos e ele está armazenado no ATCC desde então. Na base de dados de publicações científicas PubMed, você encontra mais de 1.700 artigos (200 deles em 2015) dedicados à pesquisa dessa cultura.
Pesquisadores de um laboratório da Universidade de Uppsala, na Suécia, há muito tempo estudando o U87MG, se perguntaram sobre a autenticidade da cultura contida no ATCC. Ou seja, os cientistas suspeitaram que o material originalmente isolado do tumor e o U87MG, obtido por médicos e biólogos do repositório, eram células de origens diferentes. Se isso for verdade, os resultados de muitos trabalhos científicos estarão em risco. Isso inclui ensaios de vários medicamentos que inibem o crescimento do glioma. É difícil imaginar o quão seriamente esse erro poderia ter atrasado a busca por uma cura que poderia salvar pessoas com tumores cerebrais.
Para descobrir a verdadeira origem da linha, os cientistas usaram uma abordagem chamada impressão digital de DNA. A essência do método é que a sequência de nucleotídeos (blocos de construção do DNA) no genoma de cada organismo vivo é única e pode ser usada para estabelecer relações genéticas. Os cientistas geralmente analisam repetições tandem curtas (também conhecidas como microssatélites) - pequenos pedaços de DNA (2-5 nucleotídeos de comprimento) que se repetem cinco a 50 vezes.
Células HeLa
Vídeo promocional:
Imagem: National Institutes of Health
Os pesquisadores compararam repetições curtas em tandem em culturas de células U87MG realizadas na Universidade de Uppsala (onde a linha foi isolada pela primeira vez) e ATCC. Verificou-se que 12 das 14 repetições apresentam diferenças, o que indica que as duas versões da linha celular de glioma não possuem uma origem comum. Os cientistas analisaram ainda 19 outras linhas de células que foram usadas em seu laboratório para pesquisas de tumor cerebral, e nenhuma delas combinava com o U87MG original.
Tendo assim provado que a cultura de células comerciais nada tinha a ver com o tumor do qual teria sido isolada, os biólogos decidiram determinar a verdadeira origem da linhagem. Eles examinaram bancos de dados que armazenam informações sobre várias linhas de células cancerosas. Eles se perguntaram se outras culturas têm um perfil de expressão gênica semelhante. Este último é entendido como o conteúdo na célula dos produtos dos genes ativos (tais produtos são moléculas de RNA formadas durante o processo de transcrição). Para essa tarefa, os cientistas usaram a Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE), que descreve 1.036 linhas diferentes isoladas de tumores do cérebro, mama, intestinos e outros tecidos e órgãos.
Glioma
Imagem: Christaras A
Descobriu-se que a linhagem celular U87MG pertencente à ATCC corresponde à cultura isolada de um tumor do sistema nervoso central. A confusão é provavelmente devido à contaminação cruzada com outro material biológico.
Não é a primeira vez que os cientistas enfrentam o problema do uso indevido de linhas de células. Algumas revistas médicas e biológicas insistem que as culturas usadas em artigos científicos publicados sejam testadas. A natureza exige que os autores conduzam análises de DNA. Porém, em alguns casos, como os biólogos demonstraram, é necessário ter informações sobre o perfil genético do tecido original. Os cientistas estão pedindo um afastamento das linhas comerciais como U87MG em favor de células de glioma comprovadas cultivadas em condições adequadas.
Alexander Enikeev
